發表期刊：Cancer Cell

影響因子：44.264

發表時間：2025年6月

通訊作者：Qi-Jing Li（新加坡A*STAR)、賈罄竹&朱波（第三軍醫大學）

研究緣起——當骨骼成為免疫治療的“暗礁"

近幾年，免疫檢查點抑制劑（ICB）改寫了多種實體瘤的生存曲線。然而在臨床門診里，醫生們很快注意到一個現象：一旦患者合并骨轉移，原本有效的PD-1/PD-L1抗體常常“啞火"。到底是藥物無法進入骨組織，還是骨轉移制造了全身性的免疫抑制？這篇刊登在Cancer Cell上的最新研究給出了連貫而扎實的答案。

作者首先利用5個癌種、總計1800余例的真實世界數據證明：與沒有骨轉移的患者相比，骨轉移人群接受ICB治療時，中位無進展生存期縮短了兩到三倍，而這一差異在化療或靶向治療隊列中并未出現。換言之，骨轉移對ICB療效的干擾似乎具有特異性。

研究路線——臨床發現如何被追蹤到分子靶點

為了驗證“骨轉移產生遠程免疫抑制"這一假設，研究團隊建立了“皮下+骨髓內"雙瘤小鼠模型。實驗鼠體內同時擁有脛骨髓內腫瘤和皮下腫瘤，后者可以用來模擬骨外病灶。給藥階段，研究者選用了Bio X Cell的InVivoPlus anti-PD-L1（clone 10F.9G2）進行多次腹腔注射，其低內毒素、無疊氮的配方保證了免疫研究的可重復性。結果顯示，只要小鼠攜帶骨內腫瘤，皮下腫瘤即刻對PD-L1抗體喪失敏感性。

到底是誰在骨里暗中“策反"了全身免疫？血清蛋白質組學鎖定骨橋蛋白Osteopontin（OPN）為最-顯著升高的因子。進一步的體外培養發現，腫瘤“重編程"的破骨細胞大量分泌Osteopontin。當研究者使用Bio X Cell的中和抗體InVivoMAb anti-OPN（clone MPIIIB10）或是在破骨細胞中特異性敲除Spp1（OPN 基因）時，遠端皮下腫瘤對ICB的響應被成功恢復。與此同時，RANKL抗體（Bio X Cell InVivoMAb anti-RANKL，clone IK22/5）或臨床已上市的Denosumab同樣可以阻斷破骨細胞活化，印證了RANKL–破骨細胞–OPN這條軸線是導致免疫耐藥的上游事件。

單細胞轉錄組與TCR譜系配對測序進一步揭示機制：在高OPN環境下，維持抗腫瘤火力的TCF1? Tpex細胞出現銳減，并迅速滑向衰竭型Tex亞群。而當OPN被中和或破骨細胞功能受到抑制后，Tpex庫重新充盈，PD-L1抗體的抑瘤效果同步恢復。由此，一條從骨內腫瘤出發、經血循環、最終影響遠端腫瘤免疫微環境的信號通路被完整串聯起來。

實驗方法——臨床數據與多維模型的“接力跑"

為了從臨床現象追溯到分子靶點，研究團隊設計了一條環環相扣的技術路線：

1. 真實世界數據驗證

研究者整合了肺癌、乳腺癌、前列腺癌、腎癌和黑色素瘤5個ICB隊列（共1800余例），比較骨轉移與非骨轉移患者的無進展生存期（PFS）與客觀緩解率（ORR）。同時，選取匹配人群接受化療或靶向治療作為對照，以排除治療方式本身造成的偏差。

2. 動物模型構建

在C57BL/6小鼠體內同時植入脛骨髓內腫瘤與皮下腫瘤，模擬“骨內＋骨外"雙灶。PD-L1功能阻斷使用Bio X Cell的InVivoPlus anti-PD-L1（clone 10F.9G2），每周腹腔注射。為了追蹤骨轉移對遠端腫瘤的影響，小鼠接受連續活體熒光成像與體積測量。

3. 血清蛋白質組與因子篩選

在動物模型及患者血樣中進行無標記質譜，用火山圖篩選顯著上調蛋白。Osteopontin以最高倍數差異入選候選靶點。隨后，研究者建立體外破骨細胞分化體系，采用腫瘤條件培養基刺激，實時定量PCR與ELISA 雙管齊下測定Spp1表達。

4. 功能與因果驗證

為確認OPN的必要性和充分性，團隊采用兩條平行策略：

中和抗體：使用Bio X Cell InVivoMAb anti-OPN（clone MPIIIB10）在腫瘤負荷小鼠體內持續給藥；

條件敲除：構建Ctsk-Cre::Spp1^fl/fl小鼠，特異性剔除破骨細胞中的OPN。此外，為阻斷破骨細胞活化，上游采用了Bio X Cell InVivoMAb anti-RANKL（clone IK22/5）及臨床等價物Denosumab。各干預組均在ICB基礎上聯合給藥，以評估療效恢復幅度。

5. 單細胞組學與 TCR 追蹤

腫瘤組織進行scRNA-seq與scTCR-seq。研究者聚焦TCF1?的“先導耗竭型"CD8? Tpex細胞，對比干預前后細胞譜系轉化與克隆擴增，并通過流式細胞術與免疫熒光驗證IFN-γ、TNF-α等效應因子表達水平。

6. 回顧性聯合治療評估

最后，作者回溯150例接受Denosumab+ICB的骨轉移患者，對比雙膦酸鹽+ICB組的影像學緩解及PFS，同時監測血清OPN動態，驗證動物數據在真實世界中的可遷移性。

研究結論——一條可被“截斷"的遠程免疫剎車

綜合動物實驗、單細胞組學以及回顧性臨床分析，論文得出了三點關鍵結論：

1. 骨轉移會系統性削弱ICB療效，其機制并非藥物分布受限，而是免疫學層面的遠程抑制。

2. 破骨細胞分泌的Osteopontin是核心介質。一旦阻斷OPN或阻斷RANKL激活鏈條，全身范圍內的ICB耐藥即可被逆轉。

3. 循環OPN可作為預測ICB療效的生物標志物。在真實世界隊列中，血清OPN水平越高，患者對ICB的客觀緩解率越低；而Denosumab降低OPN后，患者預后得到顯著改善

研究意義——從骨髓生態學到聯合療法新思路

這項工作把骨骼從傳統意義上的“轉移靶器官"上升為“全身免疫調控樞紐"。它提示我們，治療晚期癌癥時若忽視骨—免疫—腫瘤的三邊互動，可能低估了耐藥的復雜性。更重要的是，本研究給出了一種可執行的解題策略：利用Denosumab或針對OPN/RANKL的中和抗體與PD-1/PD-L1抗體聯合，有望讓骨轉移患者迎來第二次治愈機會。隨著多中心前瞻性試驗的推進，OPN或將成為臨床上“既是靶點，也是標志物"的雙重角色分子。

Bio X Cell體內級抗體的科研價值

從PD-L1功能驗證，到RANKL阻斷，再到OPN因果性測試，Bio X Cell三支抗體貫穿了整條證據鏈。超低內毒素、無疊氮的即用型制劑不僅保證了動物實驗的安全性和一致性，也讓來自不同實驗室的數據可以無縫對接。難怪PD-L1 clone 10F.9G2一支抗體就在PubMed被引用超過一千次；而RANKL與OPN抗體的應用也正迅速擴散到骨—免疫交叉研究的更多新靶點。對想要深耕免疫耐藥機制、并尋求快速驗證假說的科研團隊而言，Bio X Cell或將成為不-可或-缺的“實驗語言"。

Bio X Cell，賦能每一次科學探索。